Como comprovar a eficácia de um adsorvente de micotoxinas com segurança?
Comprovar a eficácia de um aditivo alimentar no adsorvente de micotoxinas exige mais do que um único teste. Este artigo descreve como a combinação de ensaios de ligação in vitro e um teste controlado com frangos de corte fornece as evidências científicas necessárias para validar um adsorvente de toxinas com total confiança.
As micotoxinas representam uma ameaça séria e generalizada para a nutrição animal, causando prejuízos econômicos substanciais em toda a indústria pecuária global. Para neutralizar seus efeitos nocivos, a eliminação das micotoxinas tornou-se uma ferramenta padrão no manejo moderno de alimentos para animais; no entanto, demonstrar a real eficácia desses produtos continua sendo um desafio significativo.
Um ponto de partida confiável é a avaliação da capacidade de adsorção (retenção) sob condições padronizadas. Esses estudos in vitro oferecem uma primeira triagem objetiva e reproduzível, permitindo uma comparação significativa entre diferentes adsorventes de micotoxinas. Mas os resultados de laboratório por si só não são suficientes: o que realmente importa, no fim das contas, é o desempenho mensurável nos animais vivos.
Este artigo apresenta uma abordagem rigorosa de duas etapas para avaliar a eficácia de adsorventes de toxinas, começando com testes in vitro e culminando em um teste científico controlado com frangos de corte.
Estudo in vitro
Estudos in vitro específicos foram desenvolvidos para replicar as condições fisiológicas encontradas ao longo do trato digestivo do animal. Na primeira fase, a adsorção de uma concentração definida de micotoxina por um adsorvente de toxinas (B.I.O.Tox®, Biochem) foi medida após três horas em um pH ácido de 3, simulando o ambiente hostil do estômago. O processo então continuou em uma fase intestinal simulada, onde a dessorção (liberação da toxina) foi registrada após mais três horas em um pH neutro de 6,5. A eficácia de ligação final é obtida subtraindo o valor de dessorção do valor de adsorção, gerando uma medida clara e comparável da verdadeira capacidade de adsorção do produto.
As taxas médias de eficácia (n=3) são mostradas na Figura 1. O produto apresentou alta eficácia de ligação em todas as micotoxinas testadas nas concentrações aplicadas.
Figura 1: Eficácia de ligação in vitro de AFB1 (20 ppb), EA (300 ppb), ZEA (450 ppb), T-2 (150 ppb), OTA (30 ppb), FB1 (1.000 ppb), DON (450 ppb) com um nível de inclusão de 1,0 kg/ton de B.I.O.Tox®.
Esses resultados promissores in vitro, no entanto, devem ser confirmados sob as complexas condições fisiológicas de um animal vivo.
Teste in vivo em frangos de corte
Em condições reais, os ingredientes dos alimentos raramente estão contaminados com apenas uma micotoxina. Frequentemente, múltiplos fungos coexistem, produzindo um coquetel imprevisível de toxinas cujos efeitos combinados podem ser aditivos ou até sinérgicos. O teste científico com frangos de corte a seguir, realizado em um centro de pesquisa independente, simula exatamente esse cenário: um desafio de alto nível com múltiplas micotoxinas, projetado para avaliar os danos fisiológicos causados pelas toxinas por meio de parâmetros histopatológicos, sorológicos e zootécnicos. Além disso, o teste investigou se o adsorvente de toxinas (BT) pode mitigar esse dano sistêmico de forma eficaz.
O teste foi realizado com 1.350 pintinhos de corte machos Cobb 500 de um dia de vida, distribuídos aleatoriamente em cinco grupos alimentares (Tabela 1).
Tabela 1: Grupos alimentares experimentais com as concentrações de adsorventes de toxinas (BT) e micotoxinas (AFB, T-2, FUM).
Todos os grupos alimentares receberam dietas isonutritivas formuladas de acordo com o Guia de Manejo de Frangos de Corte Cobb, baseadas em avaliação NIRS e compostas por milho, farelo de soja e premix vitamínico/mineral. Para garantir a integridade do experimento, as dietas completas do teste foram analisadas para contaminação por micotoxinas, mas nenhuma foi detectada.
Cada grupo foi composto por 270 aves, divididas em nove repetições com 30 pintinhos por box, mantidos em um galpão comercial sobre cama de casca de arroz. A duração do teste foi de 35 dias, e os seguintes parâmetros foram coletados:
Desempenho zootécnico: representado pela média por grupo do consumo de ração, pesos corporais, ganho de peso corporal e conversão alimentar (CA).
Histomorfologia do jejuno: avaliada pela relação altura dos vilos/profundidade das criptas (relação V/C).
Peso relativo do fígado (PRF): calculado por (peso do fígado / peso da carcaça) x 100, expresso como média por grupo.
Histopatologia do fígado: avaliada pela infiltração inflamatória heterofílica periportal com a seguinte pontuação (escore): ausente (escore 0), leve (escore 1), moderada (escore 2), acentuada (escore 3).
Histopatologia da bursa de Fabricius: avaliada pela depleção linfoide e abscessos, aplicando a mesma pontuação do fígado.
Estresse oxidativo: medido pelas substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), nmol MDA (malondialdeído)/mg de proteína, calculado como média por grupo.
Função hepática: obtida a partir da proteína plasmática total (PT), g/dl, calculada como média por grupo.
Os seguintes resultados foram observados:
Parâmetros zootécnicos
Consumo, peso e ganho de peso: O consumo de ração, os pesos corporais e os ganhos de peso corporal foram significativamente menores no grupo PC (com toxinas e sem sequestrante) em comparação com NC e NC2.
Efeito da dosagem: Nos grupos PC1 e PC2 (com adsorventes), todos os três parâmetros foram significativamente menores do que em NC e NC2, embora tenham sido numérica ou significativamente maiores do que no PC, de maneira dependente da dose (Figura 2).
Conversão Alimentar: Não foram observadas diferenças significativas na CA entre os grupos.
Figura 2: Desempenho (esquerda) e relação altura dos vilos/profundidade das criptas (V/C) (direita); a-c Valores identificados com letras diferentes na mesma linha diferem significativamente (p<0,05).
Parámetros histopatológicos
A relação V/C foi numericamente menor no PC em comparação ao NC e significativamente menor em comparação ao NC2, indicando o efeito adverso das micotoxinas no epitélio intestinal. Essa redução foi evitada com sucesso no grupo PC2 (Figura 2).
O peso relativo do fígado foi significativamente maior no PC em comparação ao NC e NC2, indicando efeitos hepatotóxicos. Para PC1 e PC2, os pesos foram numericamente menores que o PC.
A infiltração heterofílica no fígado foi maior no PC, com um escore mediano de dois, e um escore mediano de um em PC1 e PC2, em comparação a zero no NC e NC2. A distribuição dos escores individuais mostrou lesões mais leves em PC1 e PC2 do que no PC, demonstrando, por um lado, o dano hepático causado pelas micotoxinas aplicadas e, por outro lado, o efeito protetor do adsorvente de toxinas.
Na bursa de Fabricius, a depleção linfoide foi claramente maior no PC, com um escore mediano de um, em comparação a zero no NC, NC2, PC1 e PC2. Em relação aos abscessos, todos os cinco grupos mantiveram o escore mediano zero, embora o PC tenha revelado os graus mais altos detectados, mostrando a imunossupressão causada pelas micotoxinas (Figura 3).
Figura 3: Abscessos na bursa de Fabricius; uma amostra foi descartada no grupo PC.
Parâmetros serológicos
O TBARS foi significativamente maior no PC em comparação ao NC e NC2, indicando um alto nível de estresse oxidativo devido às micotoxinas. Esse aumento significativo foi totalmente evitado em PC1 e PC2 (Figura 4).
A PT foi numericamente menor no PC em comparação ao NC e NC2, e essa queda foi evitada em PC1 e PC2 (Figura 4), indicando uma síntese proteica prejudicada no fígado.
Figura 4: TBARS/PT; a-b Valores identificados com letras diferentes na mesma linha diferem significativamente (p<0,05).
Conclusão
As micotoxinas aplicadas neste teste causaram danos graves e mensuráveis em todos os parâmetros avaliados, incluindo lesões histopatológicas, piora nos marcadores sorológicos e redução significativa no desempenho zootécnico. O adsorvente de toxinas demonstrou uma eficácia forte e consistente, não apenas na captura de micotoxinas sob condições controladas in vitro, mas também em um teste in vivo abrangente. Ele mitigou com eficácia os efeitos adversos da contaminação por múltiplas micotoxinas na morfologia intestinal, nas funções do fígado e da bursa, e nos níveis de estresse oxidativo em frangos de corte.
Juntos, os achados sugerem que o produto neutralizou com sucesso as micotoxinas aplicadas antes que danos mensuráveis pudessem ocorrer nos tecidos e órgãos investigados, o que valida de forma contundente essa abordagem de avaliação em duas etapas.
